Méthode d'étude in vitro des propriétés anti-algues des désinfectants de circuits d'eau pour hémodialyse

In vitro method for evaluation of anti-algae disinfectants for hemodialysis water systems

Laboratoire de Microbiologie, Faculté de Pharmacie 4, avenue de l'Observatoire, 75006 Paris

Résumé

Les circuits d'eau rencontrés en milieu hospitalier, tels que ceux des générateurs de dialyse, sont facilement contaminés par des biofilms, au sein desquels les algues jouent un rôle non négligeable. Aussi avons-nous testé différents agents chimiques couramment utilisés comme désinfectants, aux concentrations validées utilisées en pratique dans les services de dialyse. L'étude a été réalisée avec l'eau de javel (0,01 à 0,5 ppm), l'acide peracétique (1 à 500 ppm), le formaldéhyde (10 à 50 000 ppm), le peroxyde d'hydrogène (3 à 20 000 ppm), et le chlorure de benzalkonium (1 à 100 ppm). La norme NF EN 28692 (ISO 8692, 1993) intitulée "Qualité de l'eau : essai d'inhibition de la croissance des algues d'eau douce avec Scenedesmus subspicatus et Selenastrum capricornutum" a été utilisée dans le cadre de ce travail avec l'algue verte Scenedesmus subspicatus comme souche de référence. L'inoculum était constitué par une culture en phase exponentielle de croissance (10⁴ cellules/ml) à laquelle fut ajouté chaque produit désinfectant à différentes dilutions. La norme permet de déterminer les taux de croissance et l'inhibition exprimée en Concentration d'Essai correspondant à une inhibition de 50 % (CE₅₀).

Sur le plan pratique, l'expérience nous a permis d'optimiser certains points techniques. Ainsi, un inoculum issu d'une culture initiale de quatre jours au lieu de trois tel que prévu dans la norme donne des taux de croissance sensiblement supérieurs. Un éclairement de 3 000 lux, plus réduit que les 6 000 lux prévus, et l'agitation des préparations pendant les trois premiers jours favorisent la croissance. La culture sur billes de verre ne semble pas augmenter le taux de croissance. Les résultats obtenus ont montré que pour les produits désinfectants essayés, les concentrations nécessaires pour provoquer l'arrêt de croissance des algues étaient inférieures aux concentrations définies pour obtenir l'action bactéricide et fongicide. Le traitement d'entretien régulier aux concentrations préconisées pourrait donc être considéré comme suffisant.

Abstract

Water systems in hospitals such as the ones of dialysis generators are often contaminated by obstructive organisms which are called biofilms. Very common among these are algae. To kill them we have tested various chemical agents currently used as disinfectants at the concentration used in dialysis units. Tests were done with bleach (0,01 to 0,5 ppm), peracetic acid (1 to 500 ppm), formaldehyde (10 to 50 000 ppm), hydrogen peroxide (3 to 20 000 ppm), benzalkonium chloride (1 to 100 ppm). The standard NF EN 28692 (ISO 8692, 1993) entitled: "Water quality: test for growth inhibition of fresh water algae with Scenedesmus subspicatus et Selenastrum capricornutum" was used in this study with the green algae Scenedesmus subspicatus as reference strain. The inoculum was made of culture in its exponential stage (10⁴ cell/ml) to which was added each of the disinfectants at various concentrations. The cellular concentration was measured over three days in order to determine respective growth curves, evaluate growth rates as well as the inhibition expressed as Trial Concentration which is equivalent to an inhibition of 50% (CE₅₀). On the experimental front, this method has allowed us to optimise some technical aspects of the standard. We have found that an inoculum of 4 days gives higher growth rates than one of 3 days. An illumination of 3 000 lux can be used instead of the 6 000 lux indicated in the standard. Shaking the preparation aids growth during the first three days, but has a negative effect beyond this point. Culture on glass beads does not seem to increase the growth rate. The results showed that, as for as the disinfectants tested were concerned, the necessary concentration to stop the development of algae were less than the recommended concentrations for bactericidal of fungicidal purposes. Therefore, a regular maintenance treatment could be considered as sufficient.